健胃消食片HPLC指纹图谱研究

目的：对10家生产企业的29批健胃消食片采用HPLC法建立指纹图谱，为其质量控制提供有效的依据。方法：采用Kromasil C18柱，以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，流速1.0ml/min，检测波长220nm，运用国家药典委员会指纹图谱相似度计算软件，确定指纹图谱共有峰，计算相似度。结果：通过对10家生产企业29批次样品的色谱图进行考察，发现之间差异较大；16批健民健胃消食片的色谱图相似，能建立指纹图谱，共确定了7个共有峰，其相似度均大于0.90。结论：29批次的样品无法共同建立指纹图谱进行评价；所建立的HPLC指纹图谱具有较好的精密度和重现性，可以有效表示健民健胃消食片的质量特点，能够有效控制产品质量。

【关键词】高效液相色谱；健胃消食片；指纹图谱

【中图分类号】R286.0 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2016）08-0014-03

Abstract：Objective HPLC fingerprints of 29 batches of Jianwei Xiaoshi tablets w تhich from 10 Pharmaceutical companies were established to provide an effective method of quality control for them.Methods Kromasil C18 column was used with acetonitrile-0.1%phosphate aqueous as the mobile phase by gradient elution； the flow rate was1.0ml/min， and the detection wavelength was at 220nm.Fingerprint similarity evaluation software was used to determine common fingerprint peaks， calculate the similarity.Results HPLC chromatograms of 29 batches of Jianwei Xiaoshi tablets which from 10 Pharmaceutical companies are divers； 7 common peaks were identified in fingerprints from 16 batches of Jianwei Xiaoshi tablets of Jianmin， the similarity was greater than 0.90.Conclusion 29 batches of Jianwei Xiaoshi tablets which from 10 Pharmaceutical companies cannot establish unified HPLC fingerprints； HPLC fingerprint established has better precision and reproducibility， and can effectively characterize the quality of Jianwei Xiaoshi tablets of Jianmin and control the product quality.

Keywords：HPLC； Jianwei Xiaoshi Tablets；Fingerprint

健胃消食片为常用中药片剂，是国家的基本药物。是由太子参、陈皮、山药、麦芽（炒）和山楂5味药制成的复方制剂[1]，临床用于脾胃虚弱所致的食积，症见不思饮食、嗳腐酸臭、脘腹胀满；消化不良见上述证候者。处方收载于2010年版《中国药典》一部以及国家食品药品监督局颁的各类标准中。现行质量方法中，仅采用高效液相色谱法测定指标成分橙皮苷的含量，无法较全面地分析健胃消食片的质量。指纹图谱能够较好地反映中药复杂的化学成分及其相对比例，是一种综合的、量化的分析手段，借以鉴别真伪，评价原料药材，半成品和成品质量的均一性和稳定性[2]。陈华等[3]对江中药业股份有限公司生产的健胃消食片进行了指纹图谱的研究。为了更好地对生产企业的健胃消食片进行质量控制，本实验采用HPLC法对该品种的指纹图谱进行考察。

1仪器与材料

1.1仪器美国 Waters 2695高效液相色谱仪（Empower工作站），2998 PDA检测器。Mettler XP205型（精密度为十万分之一）和Mettler XP504（精密度为万分之一）电子天平。

1.2材料橙皮苷对照品（批号：110721-200613，中国药品生物制品检定所）。磷酸（分析纯，天津化学试剂三厂），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2方法和结果

♡2.1色谱条件色谱柱：Kromasil （5μm，250mm×4.6mm） C18柱；检测波长：220nm；柱温：30℃；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）梯度洗脱（见表1）；流速：1.0ml/min。

2.2对照品溶液的制备分别取橙皮苷对照品适量，精密称定，用甲醇溶解制成每1ml含橙皮苷40μg的对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备取健胃消食片适量，研细，取约 2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水40ml，称定质量，超声处理35min，放冷，再称定质量，用水补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液20ml，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液。再用正丁醇饱和水洗涤3次，每次15ml，弃去水液。分取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加50%甲醇溶液溶解并定容至10ml容量瓶中，摇匀，经0.45微孔滤膜滤过，即得。 2.4方法学考察

2.4.1稳定性试验取同一供试品（批号：130118）溶液，分别于 0、2、4、8、12、24、48h 进样，考察各共有峰与内参比峰（♥橙皮苷 6号峰）的相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，结果各共有峰的相对保留时间RSD 0.99%～2.83%，相对峰面积比值RSD 0.95%～2.62%，表明供试品溶液在48h ♀❥内稳定性良好。

2.4.2精密度试验取同一供试品（批号：130118）溶液，连续进样6次，考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，结果各共有峰的相对保留时间RSD 0.76%～2.13%，相对峰面积比值RSD 0.92%～2.32%，符合指纹图谱要求，精密度良好。

2.4.3重复性试验取同一批号（批号：130118）的供试品溶液6份，进行测定，考察各共有峰的相对保留时间及相对峰面积比值的一致性，结果各共有峰的相对保留时间RSD 0.76%～2.11%，相对峰面积比值RSD 0.89%～2.37%，结果表明方法的重复性良好。

2.5指纹图谱的建立依据上述色谱条件和提取方法，对全国10家生产企业涉及的26批次的健胃消食片进行了指纹图谱的考察，通过对每个样品中出现的色谱峰的液相色谱图和紫外光谱图进行逐一分析，结果发现各厂家之间样品的色谱峰差异较大，无法建立共同指纹图谱。经分析显示，16批武汉健民集团随州药业有限公司抽取的样品色谱图较相近，因此对其进行特征指纹图谱研究。结果共选出包括橙皮苷（6号峰，内参比峰）在内的7个共有峰，其中2个超过总峰面积10%的色谱峰作为指纹图谱特征峰，建立该样品的指纹图谱。各特征峰的相对保留时间数据见表2。

2.6特征指纹图谱相似度评价将16批样品色谱图导入国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版（2004A）”，经校准后，生成“对照谱图”。经软件分析建立的样品色谱图和生成的对照谱图见图1-2。经软件分析得的相似度数据结果见表4。

3讨论

3.1提取方法的选择实验曾用水、50%甲醇、甲醇分别超声提取，结果杂质峰干扰严重，分离度较差。采用水超声提取后正丁醇萃取，可除去较多杂质峰，各组分能够良好分离。

3.2流动相的选择实验对不同溶剂系统进行考察，结果乙腈-磷酸水溶液流动相系统梯度洗脱具有柱压低、峰形和分离度佳及分析时间较短的特点，因此确定流动相采用A：乙腈/B：0.1%磷酸水溶液。

3.3检测波长的选择中药成分复杂，在一个波长下难以体现所有成分的特征，故对200～400nm波段的特征图谱进行分析，结合色谱峰个数和峰强度综合考察，结果在220nm波长下可以比较完整地采集样品图谱，故选择220nm作为特征图谱的检测波长。

3.4对健胃消食片标准分析和建议此次考察的健胃消食片企业涉及的标准就有11个之多，各标准采用高效液相色谱法测定指标成分橙皮苷的含量限度也多样，难以较全面系统地分析健胃消食片的质量。指纹图谱能够较好地反映中药复杂的化学成分及其相对比例，在大多数中药有效成分尚未阐明的现状下，指纹图谱可有效地表示中药质量。建立标准指纹图谱时，所选药材的基源鉴定是基础，必须准确。指纹图谱也可与生产工艺结合，完整地控制中药（制剂）的物质群体。但在实际考察过程中，由于不同企业在原料药、生产工艺等方面存在的差异，导致采集到的各样品色谱图中的组分有较大的不同，因此无法对多家企业生产的健胃消食建立共有指纹图谱。而相对同一家企业的品种色谱图相似度较高，因此能建立指纹图谱进行质控。基于健胃消食片多而杂的标准和HPLC指纹图谱的无法确定这两项原因，迫切需要统一原料药材来源、统一工艺流程，并统一标准。

实验对16批武汉健民集团随州药业有限公司生产的样品进行分析，并建立了指纹图谱，经计算指纹图谱相似度大于0.90，符合其技术要求，说明该方法能够对武汉健民集团随州药业有限公司生产的健胃消食片进行质量控制提供参考依据。

参考文献

[1] 国家药典委员会. 中中华人民共和国药典（一部）[M]. 北京： 中国医药科技出版社，2010： 122.

[2] 郑恒. 中药质量标准与中药指纹图谱[J]. 中国医院药学杂志，2003， 2（2）： 112-113.

[3] 陈华. 健胃消食片HPLC指纹图谱研究[J]. 中国实验方剂学杂志，2012，18（5）：79-82.