金黄色葡萄球菌腺苷酰转移酶耐药基因的克隆及其原核表达

【关键词】 金黄色葡萄球菌；腺苷酰转♚移酶；耐药基因；克隆；表达

金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus， SA）是人类化脓感染中最常见的病原菌， 可引起局部化脓感染， 也可引起肺炎及败血症、脓毒症等全身感染。随着氨基糖苷类药物（aminoglycosides）的广泛应用， 金黄色葡萄球菌对氨基糖苷耐药日益严重。腺苷酰转移酶是一种跨膜多重药物外排蛋白， 介导了葡萄球菌对氨基糖苷类药物（主要是亲水性氨基糖苷类药物）及多种结构上近似甚至无关的药物耐药[1]。本∞研究对腺苷酰转移酶基因进行克隆、及原核表达， 为其功能研究奠定基础。现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料

2 结果

2. 2 腺苷酰转移酶基因的PCR扩增 以临床分离株基因组DNA♂为模板， PCR扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳， 结果显示在800～1000 bp间见明显特异性条带（见图1）， 与目的基因（783 bp）大小相似。

图1 腺苷酰转移酶基因的PCR扩增

图2 重组腺苷酰转移酶12% SDS-PAGE电泳图

2. 5 重组adenylyltransferase Wตestern blot分析鉴定 使用鼠抗GST标签单克隆抗体进行Western-blot， 结果显示在55 kD左右位置见目的蛋白（见图3）。

图3 重组蛋白表达产物Western-blotting

3 讨论

对庆大霉素等氨基糖苷抗生素耐药是因细菌产生氨基糖苷类双功能修饰酶AAC（6’）-APH（2”）钝化酶所致[2]。该种耐药性的决定因子在PSK-1样质粒上。1988 年英国 Jordens 等发现金黄色葡萄球菌对庆大霉素耐药性并非质粒携带， 而是染色体携带。

在大肠杆菌、酵母菌等均进行了腺苷酰转移酶耐药基因分离及鉴定[3]， 发现adenylyltransferase基因序列和蛋白分子量与报道相符[4]。

本实验成功地对染色体介导的氨基糖苷耐药基因adenylyltransferase进行了克隆和原核表达， 得到了adenyly ltrans♡ferase蛋白[5]， 为进一步进行adenylyltransferase蛋白高级结构测定的试验做好了准备；为了解adenylyltransferase蛋白的特性和功能以及其对细菌耐药机制的深入研究奠定了基础[6]。

参考文献