白僵菌高孢粉生产技术及在农林业生物防治上的应用

1 白僵菌高孢粉生产流程和技术要点

土洋结合法生产工艺流程，主要包括以下技术环节。即原种筛选及固定、初级原种培养、中期菌液扩大、固体料扩大、高孢粉干燥、原粉提取、成品检验和包装。

1.1 原种筛选及固定 人工选育或在林区选定被菌粉感染的僵虫或僵蛹，通过培养、分离和转种，即可得到高品质菌原种。

1.2 原种培养

1.2.1 营养料的配制 取米粉35份、糖4份、琼脂4份、水适量（pH值自然），将米粉放入清水中煮沸，继之选用干净纱布过滤去剩余物残渣，然后加入琼脂、糖，经过充分搅拌，等待琼脂溶化后再装入试管内，盖好试管塞 ；营养料灌入量以试管容积的1/5为宜 ☻，5～10支一捆放人高压灭菌锅中进行高温灭菌30min，并将其趁热摆成斜面，以便于后面的接种。

1.2.2 转种和培养 严格要求在无菌条件下操作，于配制好的试管培养基中接入高品质菌原种，将其置于25℃温度下培养。经过1～2d后，菌丝即可基本布满料面；3～5d后开始形成孢子，此时可适当调高培养室温度，以加速其高品质菌原种孢子的形成，大约有6～8d的时间即可完成孢子发育。

1.2.3 质量检查 高品质菌原种，其菌丝呈白色茸毛状，生长丰满，菌苔光滑平坦，孢子形成快且孢子层厚实，轻轻碰敲试管壁可发现有很多孢子粉掉落或飞扬。

1.3 初级菌种培养 营养料的配制与前期相同，将培养好的菌原种接入三角烧瓶中，放在摇床上震动，温度控制在25～28℃，培养48h。

1.4 中期菌液扩大

1.4.1 营养液的配制 按照玉米面∶麦麸∶水=2∶3∶10的比例，放入铁制培养罐中搅拌均匀后煮熟、过滤，再将其装入60只铝制罐中（每只铝制罐10～12kg），采用高压灭菌30min后备用。

1.4.2 转种培养 在确保无杂菌污染的条件下，将优质菌种接入已经准备好的营养液中，完成接种后将瓶子放置于25～28℃条件下进行培养，环境温度不得超过32℃，否则易造成所接种的菌种死亡；培养48h待菌丝长满瓶壁，良好的菌液呈显酱红色、粘稠状，此时结束培养，将其移放到比较安全的地方待用。

1.5 固体转种生产

1.5.1 固体基料的配制 按麸皮∶谷壳∶大米=4∶4∶2比例，拌匀后装入线制麻袋（每袋15～25kg为宜）扎紧袋口，加温加压灭菌（100℃、2～3h）。

1.5.2 转种生产 将灭菌后的固体基料，放入已经过充分消毒的培养生产室内，待料温下降至到25～28℃之间，可在一般的自然环境中进行接种。接种量：菌种和固体基料的比例通常控制在15∶100。接种时需要多人配合，1人操作倒出菌种，多人辅助进行手工拌料，菌种和固体基料经过充分手工拌匀后倒入木质或塑料盘中拌好、铺平，厚度要求控制在3～4cm之间。

1.5.3 白僵菌生长期间管理 白僵菌生长期间，根据其不同的生长阶段，要合理控制好温度，这是大床发酵成败与否的关键，适时进行上下调盘，保证菌丝生长均衡匀称。

1.5.3.1 孢子产生期间 其孢子产生前期最合适的温度是在24～26℃，在生长的第1阶段（即孢子萌芽前期），必须将环境温度控制在21～23℃范围内，因为此阶段不产生热量，所以室温约高于料温2～3℃，从而满足了此期间对温度的要求。到了孢子萌芽阶段，特别是在转种24h之内，一定要严格控制料温，维持在25℃以下就能有效地阻止杂菌污染。

1.5.3.2 菌丝生长中期 当孢子萌芽后，其芽管迅速增长而转入菌丝生长中期，若条件适宜接种48h菌丝快速生长，可以布满整个料盘，此时固体料开始凝。结成块；由于菌丝生长产生较多热量，会导致料温快速上升，48h达30～35℃，达到最高峰值；以后稳定至72h左右，菌丝生长基本结束。料盘内外都呈现出一片白色菌丝层。此阶段应严格控制温度在33℃以下，一旦超过33℃虽然菌丝生长旺盛，但会导致菌丝死亡或固化，不产生孢子或孢子量少。

1.5.3.3 孢子生长阶段 菌丝生长发育结束（即接种72h）后，很快转入孢子生长阶段。孢子产生的最适温度为26℃左右，此阶段培养室温度应控制在26～28℃；因为此时料温已经恒定，约高于室温2～3℃，固体菌料会逐渐变干，通常在第7d即可出料。将固体菌料倒扣在铺有报纸的竹席上，放置于室温30～35℃的干燥通风房间内，至第10d孢子达到充分发育，固料呈现白色松散状态，即可进行下一步的干燥处理。

1.6 高孢粉干燥 通常放在室内或大棚通风处阴干，或在室内低温干燥，时间约为7～10d。

1.7 原粉提取 利用负压原理，将干燥好的混合菌料进行一、二、三级提取，一级分离稻壳、麦麸，二级分离破碎稻壳、麦麸及其它细料，三级收集高孢粉（孢子含量1 000亿个/g）

1.8 产品质量检查

1.8.1 直观检查 用手指接触到高孢粉产品时有光滑感，白色略黄粉雾飞扬，粉雾越浓，说明孢子含量越高、质量越好。

1.8.2 镜检 在显微镜下检查高孢粉产品的孢子含量，成品含活孢子数1 000亿/g以上为好。

1.9 产品包装 高孢粉产品干燥后，要求用双层塑料袋密封包装，以防其回潮；要将其放在低温干燥处或冷藏，不能多层叠放，以免因孢子的吸呼作用增温而引起孢子死亡。

2 白僵菌高孢粉在生物防治中的应用

利用白僵菌高孢粉防治或预防农林业害虫，已有较长的历史。白僵菌的孢子能够在任何条件通过感染达到杀灭害虫的目的。据调查，白僵菌在我国可寄生15个目、159个科的800余种昆虫，对自然环境比较安全，长期使用害虫也产生不了抗药性，并可与许多化学农药（杀虫剂유、杀螨剂、杀菌剂等）同时或混合使用。目前白僵菌已广泛用于松毛虫、玉米螟、蛴螬、蝗虫、马铃薯甲虫、松褐天牛、茶蝉、桃小食心虫等农林害虫防❥治。

2.1 白僵菌对森林害虫的感染机理 白僵菌感染害虫的方式主要通过皮肤而进入体内，但个别也通过消化道或气孔感染虫体。白僵菌孢子附着于寄主表皮，当满足条件时就开始感染，生出芽管，同时分泌胞外蛋白酶等多种酶溶解昆虫表皮，以利于芽管的侵入。渐渐生长为菌丝，直接吸取昆虫体内养分而生长，菌丝又生长出新的孢子。如此反复感染、循环，使昆虫血淋巴中到处游离着这种菌丝和孢子，从而中断昆虫体内的血液循环。菌丝代谢产物草酸盐类在血液中渐渐积累，造成血液的酸碱度下降，引起理化性质的改变，最终导致昆虫的死亡和干枯。

2.2 白僵菌高孢粉在林业害虫防治中应用 （以皖东马尾松毛虫防治为例）

2.2.1 施菌季节和天气 白僵菌在22～28℃、相对湿度80%的条件下生长、发育良好，为此皖东地区主要选择在4月份至越冬代幼虫期使用，以及第一代幼虫（6月上旬）、第二代幼虫（9月下旬）发生时使用。施菌时间一般在阴雨天后或早晨露水未干时或傍晚时分，微风有利于菌粉扩散、释放。

2.2.2 施菌方式和用量 白僵菌可重复扩散、感染、蔓延，施菌时，首先要摸清虫情，找准虫源地，根据虫口密度和虫株率大小，分别采取机械或人工全面喷洒、带状喷洒、点状喷洒，原粉用量10～15g/667m2，可稀释后使用。

2.2.3 防治效果 根据滁州市采用我厂生产的白僵菌高孢粉防治马尾松毛虫试验，松毛虫能持续、重复感染，造成不同虫龄的活体松毛虫大量死亡，并且安全、无污染，对人蓄无害，防治效果一般可达85%以上，局部可达100%，连续使用效果更佳。可用于长期防治大面积、低虫口密度马尾松林松毛虫危害，做到有虫不成灾。

2.3 白僵菌高孢粉在农业害虫防治中的应用 （以吉林玉米螟防治为例）

℉ 2.3.1 菌种剂型筛选 根据不同地区玉米螟田间发生、危害规律及各种因素的影响，可选择不同的剂型。目前有4种粉、液剂剂型可用于大田玉米种植区选择；有2种粉、液剂剂型可供玉米（甜、粘玉米）分期播种田防治玉米螟选择。

2.3.2 防治方法 防治方法有2种，分别是喷粉和喷雾。一是封垛（秸秆垛）防治法，主要是针对玉米秸秆垛内的越冬代老熟幼虫，杀死越冬玉米螟老熟幼虫，降低化蛹率。在冬末春初越冬幼虫刚刚复苏化蛹前（有越冬幼虫爬出洞口活动中），对残存的秸秆，逐垛喷撒高孢原粉封垛进行防治。用量是每m2垛面用含1 000亿/g孢子的菌粉10～15g喷一个点，方法是将喷粉管插入垛内，摇动，当垛面冒出菌粉即可。也可用含1 000亿/g孢子的白僵菌粉加滑石粉或草木灰按1∶100充分混匀，每667m22～3kg，用机动或手摇喷粉器喷粉。二是在玉米生长心叶末期，应用高孢粉粉剂或液剂向植株喷粉或喷雾，防治玉米螟第一代幼虫。三是释放颗粒剂防治，在田间玉米螟幼虫蛀茎危害前释放，以达到杀死田间玉米螟幼虫的目的。

2.3.3 防治效果 使用高孢粉原粉防治玉米螟防治效果可达80%以上，方法简单易行，防治效果极佳，能保护害虫天敌，无环境污染，对人蓄安全，同时节约成本，增产显著。

3 白僵菌在农林有害生物防治中的应用前景展望

针对白僵菌在实际应用中存在的杀虫效果较慢、防治效果不稳定、释放方法不易操作、产品相对其它药物成本偏高等缺点，尝试通过白僵菌制剂与化学杀虫剂或其他生物杀虫剂混配来弥补，并且已经取得了较好的成效。例如采用白僵菌与绿僵菌混合使用，其杀虫效果就优于单独使用白僵菌的效果。随着科学技术的不断拓展，进一步对白僵菌的生产工艺加以改进，以方便于白僵菌高孢粉产品的运输与应用，一定会研究出效果稳定、释放简捷的高效产品。加大宣传力度，促进高效白僵菌制剂等相关成果和技术的推广与应用，前景十分看好。开发新的白僵菌助剂、剂型，创新化学农药与白僵菌制剂混合使用技术等，也有着诱人的魅力。尽管目前还存在着一些问题和困难，但随着研究的不断深入和技术的不断创新，剂型多样白僵菌高孢粉制剂将会更广泛地应用于农林害虫的防治。