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第一篇:《蛋白质的检测流程》

实验一 生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定教案

一、实验原理

（1）鉴定实验设计的理念：

某些化学试剂 + 生物组织中有关有机化合物色反应。

（2）具体原理：

①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。

②脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。

张志真③蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色反应。

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二、目标要求

初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

三、重点、难点

1.重点

①初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

②通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握探索实验设计技巧，从而培养创新思维能力。

2.难点

根据此实验方法、原理，设计实验来鉴定常见食物的成分。

四、实验材料 产生特定的颜

1.可溶性还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。鉴定蛋白质的步骤

2.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。

3.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。

五、仪器、试剂

1.仪器:剪刀,解剖刀,双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,研钵,石英砂,纱布,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。

2.试剂:①斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO4溶液)；

②苏丹Ⅲ染液；③双缩脲试剂；④ 体积分数为50%的酒精溶液；⑤蒸馏水。

六、方法步骤(演示教学课件)

1.制备试剂。

2.可溶性还原糖的鉴定、方法、步骤。

3.脂肪的鉴定、方法、步骤。

4.蛋白质的鉴定、方法、步骤。

七、教学过程

新课引入：我们在化学中学习过物质的鉴定，其原理是被鉴定的鉴定蛋白质的步骤

物质与所用的化学试剂要么发生颜色反应，要么产生沉淀，我们生物学上也采用此原理，在生物学中物质鉴定的理念是：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。

新课教学：（具体原理）

①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。（水浴加热）

②脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。（要显微镜观察） ③蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色反应。（要先加A液NaOH 溶液再加B液CuSO4 溶液）

教师提问：在我们高中生物中还学习过那些利用颜色反应鉴定物质的？用到了那些化学试剂？由产生了那些特定的颜色呢？

学生回答：略。如果回答不全教师补充：

④染色（质）体+ 红色（或紫色） ⑤淀粉+碘液蓝色

蓝色（水浴加热）

产生紫色，略带金属光泽 ⑥DNA+二苯胺试剂⑦大肠杆菌+伊红-美蓝今天，我们学习鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

（一）、还原糖的鉴定

1、还原糖的鉴定步骤:

选材：苹果：洗净、去皮、切块，取5g放如研钵中

制备组织样液 研磨成浆：加石英砂，加5 ml水研磨

注入组织样液2ml 过滤：将玻璃漏斗插入试管中，漏斗上垫一层纱布 加斐林试剂：2ml鉴定蛋白质的步骤

（由斐林试剂甲液和乙液充分混合而成，不能分别加入）

水浴加热：煮沸2min

观察溶液颜色变化：浅蓝色→棕色→砖红色。鉴定蛋白质的步骤

结论：还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中生成砖红色沉淀 组织样液2ml 刚配制斐

林试剂2ml

砖红色

2、实验成功的要点： 无色 蓝色 开水 加热2min

①还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。

②斐林试剂要两液混合均匀且现配现用。

斐林试剂的配制过程示意：

斐林试剂甲液（ 0.1 g/ml的 NaOH 溶液）斐林试剂乙液（ 0.05 g/ml的 CuSO4

③在鉴定尿液中是否含有葡萄糖时还能用其他那些鉴定方法？ 按一定比例混合均匀 斐林试剂

学生回答：还可以用斑氏试剂产生砖红色沉淀；及糖尿试纸据糖的由少到多产生浅蓝、浅绿、棕或深棕色。

（二）、脂肪的鉴定

1、脂肪的鉴定步骤:

取材：花生种子（浸泡3-4h）,将子叶削成薄片 取理想薄片 制片

在薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ染液 去浮色 制成临时装片

观察：先在低倍镜下，找到材料的脂肪滴，然后，转为高倍镜观察。 结论：细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色。

2、实验成功的要点：

①.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。

②该试验成功的关键是获得只含有单层细胞理想薄片。

③滴苏丹Ⅲ染液染液染色2-3min，时间不宜过长，以防细胞的其他部分被染色。

（三）、蛋白质的鉴定

1、 蛋白质的鉴定步骤：

选材：卵清稀释液或黄豆（浸泡1-2d豆浆 滤液 呈

色

第二篇:《蛋白质的分离纯化与分析鉴定》

蛋白质的分离纯化与分析鉴定

摘要：蛋白质的分离纯化方法是生命科学领域关注的热点。根据蛋白质的酸碱性质、分子大小与形状、溶解性质及其与配体亲和性等,对其分离纯化和分析鉴定方法进行了综述。分离纯化某一特定蛋白质的一般方法包括前处理、粗分级分离、细分级分离和纯度鉴定四步，本文重点介绍讨论了步骤三中的几种主要方法。 关键词：蛋白质，分离，纯化，鉴定

一、引言

实践活动报告

生物体内的大部分生命活动如催化代谢反应、物质运转、运动的相互协调、兴奋的传导、生长与发育等，均是在蛋白质的参与下完成的。因此,研究蛋白质对了解生命规律、指导工业生产、医药实践有着重大意义,而蛋白质的分离纯化是蛋白质研究中必不可少的一个环节。必须要了解目的蛋白的分子量、等电点、溶解性及稳定性等基本性质才能制定出合理的分离纯化方法。由于不同的蛋白质结构和性质不同,分离方法也不同,例如根据分子大小可使用差速离心、分子筛、超滤或透析等分离技术；根据溶解度大小的不同，使用盐析、溶剂抽提、分配层析、结晶等方法分离；根据所带电荷的不同，可采用电泳、等电点沉淀、离子交换层析等方法；根据结合亲和性，可用新和层析进行分离。蛋白质的分离纯化技术种类是很多的而且发展很快某些技术如以前不多见的超滤分离方法,目前在国内应用已相当普遍，除此之外广泛使用的层析、电泳方面也不断出现新的技术和方法。如层析方面,高压液相色谱是一种具有快速和分辨力的柱层析技术。

二、正文

分离纯化某一特定蛋白质的一般方法包括前处理、粗分级分离、细分级分离和纯度鉴定四步：

一、选择含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低的材料进行预处理。根据分离纯化的原料不同,要采取不同的方法进行预处理。例如动物材料要去掉结缔和脂肪组织；植物和细菌要将细胞壁进行破碎；植物种子的去壳除脂；微生物的菌休和发酵液要进行分离等等。破碎主要采取超声波振荡、研磨、高压挤压或酶处理等方法。组织和细胞破碎以后,选择适当的缓冲溶液将目的蛋白质提取出来,细胞碎片等不溶物质用离心或者过滤的方法除去。

二、分离纯化某一蛋白质首先要将蛋白质从原来的组织中释放出来,并且保持原有的天然状态,不丢失活性物质。常用的溶剂是稀盐酸溶液和缓冲液、某些与脂类结合牢固、或分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取。

三、用适当的方法将蛋自质从抽提液中分离出来并将所需蛋白质和其他杂蛋白分开。由于原料中蛋自质成分复杂往往含有几百种以上，因此提纯一种蛋白质通常需要多步骤完成。

四、纯度鉴定的简便方法是层析法和电泳法、检验有生物活性的蛋白质则用测定活性法。一般要用两种以上的方法相互验证,才能肯定一种蛋白质的纯度。

愿归来仍是少年

本文将重点讨论步骤三中的几种主要方法。透析和超滤是分离蛋白质时常用的方法。透析是将待分离的混合物放入半透膜制成的透析袋中,再浸入透析液进行分离。超滤是利用离心力或压力强行使水和其它小分子通过半透膜,而蛋白质被截留在半透膜上的过程。这两种方法都可以将蛋白质大分子与以无机盐为主的小分子分开。经常与盐析、盐溶方法联合使用,在进行盐析或盐溶后可以利用这两种方法除去引入的无机盐。由于超滤过程中,滤膜表面容易被吸附的蛋白质堵塞,以致超滤速度减慢,截流物质的分子量也越来越小，可选择合适的滤膜,也可以选择切向流过滤以克服这一缺点得到更理想的效果。

层析法：最常用的层析法是凝胶过滤和离子交换柱层析。凝胶过滤又叫分子筛层析，凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，比“网眼”大的蛋白质分子不能进人凝胶颗粒内部,沿着颗粒间隙流动,流程短,流速快,最先流出柱外；比“网眼”小的分子则进人凝胶粒内部,沿着孔道移动,从一个颗粒流出,又进人另一颗粒,所以下移速度慢,随后被洗脱下来。这样溶液中的物质就按不同分子量筛分开了，可用于蛋白质的脱盐、分离、提纯、分析等等。离子交换层析是在以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。利用此反应将要分离的混合物先在一定pH值的溶液中全部解离；而后流过固相使之与固相的离子进行交换，吸附于固相；再根据混合物中各组分解离度的差别，用不同pH值溶液分别洗脱下来。

等电点沉淀和pH值调节是最常用的方法。每种蛋白质都有自己的等电点,而且在等电点时溶解度最低；相反,有些蛋白质在一定pH值时很容易溶解。因而可以通过调节溶液的pH值来分离纯化蛋白质。王洪新等研究茶叶蛋白质提取过程发现,pH值为4时茶叶蛋白提取效果最好,提取率达到36.18%,初步纯化得率为91.10%。

亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。这种方法是根据某些蛋白质与另一种称为配体的分子能特异而非共价地结合。

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