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第一篇:《母液配制》

植物组织培养母液配置

一、实验目的

学习配置培养基的母液，掌握配制方法，了解母液存储方法

二、实验原理

配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的 母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。

三、实验器材、试剂

1器材 电子天平 烧杯（50ml 100ml 500ml 1000ml）量筒（1000ml 100ml 25ml） 容量瓶（100 500 1000）

2试剂NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl2·2H2O,MgSO4·7H2O,FeSO47H2O

Na2-EDTA,MnSO4·4H2O,ZnSO4·7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4·2H2O

CuSO4·5H2O,CoCl2·6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸， 蒸馏水

四、实验步奏：一、母液的配置

1、MS大量元素母液的配制

一般将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 ,KH2PO4 、MgSO4.7H2O 、CaCl2.2H2O的量，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。

2、MS微量元素母液的配制

一般将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O 、H2BO3 、NaMoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、 CoCl2·6H2O扩大100倍的量，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。

3、MS铁盐母液配制

一般将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：FeSO4·7H2O和Na2·EDTA?2H2O的量，把FeSO4·7H2O和 Na2·EDTA?2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积1000ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于冰箱中保存备用。

二、植物激素的配置

常见激素：2，4－D、萘乙酸、吲哚乙酸、、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、

1、生长素类：

（1）生长素类：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织配置母液，微量元素浓缩100倍‘

（2）常见生长素：二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚－3－丁酸。NAA、IAA、IBA被广泛用于生根，2，4－D有利于愈伤组织的诱导和生长。

（3）保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存

2、细胞分裂素

细胞分类素：促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。

（1）常用的细胞分裂素有： 6－苄氨基嘌呤（6－BA）、激动素KT）、玉米素、噻二唑苯基脲

（2）保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存

3、赤霉素（GA3）

（1）保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存

（三、培养基的制备与灭菌

（一）、培养基的制备

1、将所需的各种母液和植物激素按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿等放在指定位置。

2、取烧杯一个内盛200ml蒸馏水，按照培养基配方所需量依次取母液和植物激素加入烧杯，搅拌，按相应培养基称量蔗糖和琼脂，并添加到烧杯中，在电炉上加热待琼脂完全融化后加蒸馏水定容至所需体积。

3、充分混合后，用1mol/LNaOH和1mol/LHCl调节培养基的pH为培养基要求pH值。

4、趁热把培养基分装到广口瓶中。封好瓶口。待灭菌。

（二）、培养基的灭菌

灭菌温度及灭菌时间：121℃（1.06kg/cm2）下灭菌20分钟。（如是实验所用菌材灭菌，如无菌水及器械，则是121℃（1.06kg/cm2）下灭菌30分钟）

1、检查灭菌锅外层锅内水位，水量过少时应加水。把分装好的培养基放入灭菌锅的消毒桶内。

2、盖上锅盖，注意按照说明操作并确定已盖好，设置好温度和时间参数，开启电源加热灭菌。

3、灭菌时间到后，先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，待灭菌锅压力表指针降到0时，打开排气阀，旋松螺栓，开启锅盖，取出已灭菌的培养基。

4、刚灭过菌的培养基成液体状，取出时不要用力摇动，否则会导致部分培养基沾附在瓶壁。放置在水平桌面上自然冷却。在室温下放置1-2天，观察有无微生物生长，以确定培养基是否彻底灭菌。经检查没有杂菌生长的方可使用。

五、培养基凝固不好的原因

1.培养基组分中琼脂的用量和质量

2. PH值试纸检测培养基的酸碱度，看培养基是否过酸，一般PH值低于4.8时凝固不良，过酸加氢氧化钠，过碱加盐酸；当需要较酸的培养基时，可以适当增加琼脂的用量。

3. 灭菌时间过长，一般在0.15MPa超过1小时后易凝固不良。

4.考虑称量工具是否准确，有些小市场买的称量工具不是很准确。

第二篇:《植物组织培养母液的配制与保存》

植物组织培养母液的配制与保存

目的

熟练掌握植物组织培养中各种成分或成分组的母液（比需要量大若干倍）的配制方法。 实验仪器

电子天平（感量为0.0001g）、一般天平（感量为0.1g）、烧杯100mL 50 mL 25mL）、量

筒（1000 mL 100 mL 50 mL）、容量瓶200 mL 100 mL 50 mL 25 mL）、细口瓶（500 mL 200 mL 100 mL 50 mL）、药勺、玻棒、电炉等。 实验试剂

按培养基配方准备

实验原理

一）培养基的组成

培养基是植物组织培养中的―血液‖，血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此了解培养基的成分、特点及其配制至关重要。自然状态下生长的绿色植物由于自身能进行光合作用，并且能合成植物生长发育所需的几乎所有有机成分，加上土壤中含有较全面的无机和有机营养成分，所以只需在适当的时候施加少量的无机和有机肥（复合成分），植物就可良好的生长。目前所使用的培养基有10余种之多，大部分都是在前人研究的基础上经过分析综合和改进而成的。例如，White培养基是Uspenski和Uspenskaia（1925）的藻类培养基演化的结果，被广泛用于根的培养；Cautheret培养基是建立在Knop营养液(1865)基础上的。以后的培养基大部分是在White和Cautheret培养基的基础上改进而成。 就目前所使用的各种培养基而言，可将它们的成分划分为几大类，常用的有MS、 B5 、和White培养基等。

1．水 水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。 2．无机营养成分：

大量元素，主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种配置母液，微量元素浓缩100倍‘

微量元素：培养基的微量元素主要包括铁（Fe）、锰（Mn）、铜（Cu）、锌（Zn）、氯（Cl）、硼（B）和钼（Mo）等。这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要，有的是参与某些生物过程的调节。

3. 有机营养成分（包括维生素，氨基酸及其它有机物质等）

维生素：硫氨素（维生素B1）盐酸吡哆醇（维生素B6）和烟酸 在部分培养基中还添加维生素BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、维生素H（生物素）、维生素B12（氰钴胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）、泛酸钙和氯化胆碱等维生素。

氨基酸：甘氨酸（氨基乙酸）和肌醇（环己六醇）也是一些培养基的添加成分。

其他：在某些植物或某些组织的培养中还加有水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰子汁、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁和酵母浸出物等。这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用，如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。 4. 碳水化合物 所有的植物组织培养基都需要有碳水化合物作为能源，用作碳源的碳水化合物通常为蔗糖或D-葡萄糖，用量通常为2%-4%，高者可达5%，亦可用市售的白糖所

代替，但一般应增加用量，而且最好用比较固定的厂家生产的产品，以保证实验的稳定性。 5. 植物生长调节物质（常称为激素）： 生长素类有：NAA（萘乙酸）、IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、NOA（萘氧乙酸），P-CPA（对氯苯氧乙酸）、2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸），2，4，5-T（2，4，5-三氯苯氧乙酸）等； 细胞分裂素类主要有：从甜玉米未成熟种子或其他植物中分离到的玉米素[6-（4-羟基-3-甲基-反式-2-丁烯氨基）嘌呤]。人工合成的细胞分裂素主要有激动素（KT，6-呋喃氨基嘌呤）、 6-苄基腺嘌呤（6-BA）、2IP（异戊烯氨基嘌呤）和TDZ（thidiazuron,噻二唑苯基脲）等。细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成； 赤霉素：主要是GA3，虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因为它的作用往往是负面的； 乙烯等。

6. 琼脂或其他支持物

除液体悬浮培养外，就目前情况而言，琼脂是一种极为理想的支持物。一般浓度0.4%-1%，质量越差的琼脂用量越大。

7. 其他添加剂（含天然提取物、抗生素等） 活性炭 渗透调节剂 抗生素 抗氧化剂等

二）培养基的选择

选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。

实验内容与步骤

一）MS大量元素母液的配制

一般将大量元素分别配制成10倍的母液，使用时再分别稀释10倍。 依次分别称取：

NH4NO3 16.5g KNO3 19.0g KH2PO4 1.70g

MgSO4·7H2O 3.7g CaCl2·2H2O 4.4g

共配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 二）MS微量元素母液的配制

一般将微量元素配制成100倍母液。依次称取： KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025g H3BO3 0.62g 旅行英语 CuSO4·5H2O 0.0025g MnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025g

ZnSO4·7H2O 0.86g

配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小，如果天平精确度没有达到万分之一，可先配

成调整液。 分别称取

CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g

各自配成100ml的调整液，然后取5ml就还有0.0025g的量。 三）MS有机质母液的配制

一般配制成100倍MS有机母液。 依次称取

肌醇 10g 盐酸硫胺素（VB1） 0.01g 烟酸 0.05g 甘氨酸 0.2g 盐酸吡哆醇（VB6） 0.05g

配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

四）MS铁盐母液的配制

一般配制成100倍MS铁盐母液。依次称取：EDTA二钠 3.73g 和FeSO4·7H2O 2.78g，配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。

所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液，共8种母液。

五）几种生长调节物质的配制

槛外长江空自流

各种生长素和细胞分裂素这样的画面让我流连要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解，细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解，然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。

母液的保存：一般将以上配制好的各种母液保存在4℃左右冰箱内。

注意事项

1. 称量要精确

2. 配制母液时要注意药品溶解的先后顺序，以免发生化学反应，使的产生沉淀。

附：MS培养基母液的配制与保存

仪器与用具

1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱等。

2、用具：烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签等。

3、试剂：95%酒精，0.1-1 NaOH，0.1-1NHCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，蒸馏水。

方法步骤

（一）母液的配制

母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。 优点：

（1）保证各物质成分的准确性。 （2）便于配置时快速移取。

（3）便于低温保藏。

1、MS大量元素母液（10X）

称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。

2、MS微量元素母液（100X）

称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。

mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，（即含0．25 mg的量），加入到母液中。

3、MS铁盐母液（100X）

称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 当加热。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。

4、MS有机物母液（100X）

称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。

5、生长调节剂

单独配制，浓度为1-5 mg/ml（书中为0．5 -1mg/ml），一般配成4 mg/ml 。 配制培养基母液时注意事项：

①一些离子易发生沉淀，可先用少量蒸馏水溶解，在按配方顺序依次混合； ②配制母液时必须用蒸馏水或重蒸馏水； ③药品应用化学纯或分析纯；

④溶解生长素时，可用少量0．5 –1N的NaOH 或95%酒精溶解，溶解分裂素类用0．5 –1N的HCl加热溶解。

（二）母液的保存

1、装瓶：将配制好的母液分别装入试剂瓶中，贴好标签，注明各培养基母液的名称、浓缩倍数、日期。注意将易分解、氧化的溶液，放入棕色瓶中保存。 2、贮藏：4℃冰箱。

附：组织培养室操作程序

一. 生产环境

1. 工作人员进入组培室必须穿工作服，包括更换拖鞋、穿白大褂，接种人员还要带帽、带

口罩。 2. 所有人员在组培室内不准高声喧哗、打闹。

3工作期间，各生产房间要关闭房门，尤其是接种间；工作人员出入要随手关门。

4各种生产用品要安固定的位置排放整齐，不可乱拿乱放。 5工作过程中所产生的垃圾要及时清理，尤其是接种间，其内垃圾停留时间不得超过4小时。

二. 接种程序

1. 准备工作：接种人员在正式接种之前要做好准备工作，包括准备酒精灯、新洁尔

灭、灭菌用脱脂棉以及准备接种工具、分取培养基、接种用苗和工作台灭菌等。

·酒精灯用工业酒精作燃料，而非75%酒精。

·工作台上用的新洁尔灭浓度是0.1%，而非0.01%。配置母液，微量元素浓缩100倍‘

·工作台灭菌包括两步：一是上台前用紫外灯照射30分钟，二是正式接种前再用新洁尔灭仔细擦一遍。

王慧媛

·培养皿的取放：从布包里取培养皿时，一定要注意，手不能接触培养皿的边沿，同时要尽可能减少与培养皿的接触面，一般规定只能用双手的拇指和食指取放。

·接种工具灭菌也分两步，一是用灭菌布包裹好，在高压锅里灭一次，这一步

第三篇:《植物培养基母液的配制》配置母液，微量元素浓缩100倍‘

实验1 培养基母液的配制

一、 实验目的

掌握培养基母液的配制方法。

二、 实验原理

配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液可分为MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。另外，还要配制生长调节物质母液，在不同类型的培养基中使用。

三 、实验器具和药品

电子分析天平、扭力天平、烧杯（50mL、100mL、500mL、1000mL）、量筒（1000mL、100mL、25mL）、容量瓶（1000mL、500mL、100mL）、磨口试剂瓶（500mL、1000mL）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉（1000W）、冰箱。

配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。植物生长调节物质2，4-D、NAA、6-BA等。

四、培养基母液的配制过程

首先，按书中MS培养基的配方，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后分别进行药品称取和母液配制。具体操作如下：

（1）MS大量元素母液（20倍）的配制。

按照MS培养基的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。配制时先用量筒量取蒸馏水大约800mL，放入1000m

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